久久综合久久美利坚中国_中曰韩无码视频_久久97久久97精品免视看_黄网址免费永久在线观看免费

美國(guó)**BTX是專業(yè)的細(xì)胞融合、電穿孔儀的生產(chǎn)廠家。ECM 630電穿孔儀在轉(zhuǎn)基因的應(yīng)用領(lǐng)域中得以廣泛的應(yīng)用，其無(wú)以倫比的高性能得到了全球同行的厚愛(ài)。BTX的系列產(chǎn)品適用于動(dòng)植物、細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物、人類細(xì)胞（包括活體細(xì)胞）的轉(zhuǎn)基因等操作，操作方法可參照相關(guān)文獻(xiàn)，及向廠商索要。ECM 630電穿孔儀是多才多藝型細(xì)胞轉(zhuǎn)基因儀，適應(yīng)于各類細(xì)胞．

ECM 630電穿孔儀應(yīng)用舉例：

10-500V電壓：適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞，植物細(xì)胞

50-2500V電壓：適用于細(xì)菌、酵母各種型號(hào)，均有多種脈沖選擇

•細(xì)菌/酵母轉(zhuǎn)化（系統(tǒng)：ECM399/630）

電穿孔現(xiàn)在被認(rèn)作是轉(zhuǎn)化細(xì)菌及酵母的***的方法。革蘭氏陰性細(xì)菌（例如大腸桿菌）一般比革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌更容易轉(zhuǎn)化，因?yàn)樗麄兊募?xì)胞壁組成不同。對(duì)于革蘭氏陰性細(xì)菌常?？梢垣@得10的10次方轉(zhuǎn)化2/微克DNA的轉(zhuǎn)化效率，而對(duì)于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，一般可以得到10的6次方轉(zhuǎn)化2/微克DNA。Chang等人（1997）成功對(duì)一個(gè)mtz-敏感的Heliobacterpylori菌株進(jìn)行電穿孔以傳遞mtz抵抗性。Planelles等人（1999）使用電穿孔轉(zhuǎn)化大腸桿菌，以避免使用包裝物質(zhì)。*近電穿孔儀器方面的進(jìn)展將使研究人員能夠進(jìn)一步優(yōu)化細(xì)菌轉(zhuǎn)化（例如脈沖長(zhǎng)度產(chǎn)生方面擴(kuò)展的功能條件）。

RNA、DNA、蛋白質(zhì)以及小分子都已經(jīng)通過(guò)電穿孔的方法轉(zhuǎn)入酵母。沒(méi)有必要在電穿孔前部分去除酵母細(xì)胞壁，因?yàn)樵谕暾湍鸽姶┛追矫娴倪M(jìn)展可以產(chǎn)生高的轉(zhuǎn)化率。Faber等人（1994）年優(yōu)化了S.Cerevisiae的實(shí)驗(yàn)方案，使用HansenulaPolymorpha獲得了比以前的報(bào)告增加300倍的轉(zhuǎn)化效率。

在質(zhì)粒修復(fù)中，質(zhì)粒從酵母轉(zhuǎn)入大腸桿菌以進(jìn)行詳細(xì)的DNA序列分析，這是另外一種重要的技術(shù)。這種兩個(gè)步驟的過(guò)程被電穿孔進(jìn)行了簡(jiǎn)化，用于驗(yàn)證隱性基因的結(jié)構(gòu)，將其導(dǎo)入酵母，看基因性和表現(xiàn)性之間的關(guān)系。已經(jīng)建立了標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)方案使用指數(shù)衰減波發(fā)生器例如BTXECM630轉(zhuǎn)化細(xì)菌/酵母。使用方形波電穿孔儀的實(shí)驗(yàn)方案，例如BTXECM830，來(lái)轉(zhuǎn)化細(xì)菌/酵母。研究人員還成功將大的質(zhì)粒（BAC及YAC）導(dǎo)入細(xì)菌。電穿孔杯是細(xì)胞及酵母電穿孔的*常用附件，而Model747共軸電極使用則變得越來(lái)越普遍。

•動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染（系統(tǒng)：ECM630/830）

對(duì)真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染可以通過(guò)多種方法獲得，例如磷酸鈣沉淀、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、病毒方法以及電穿孔。電穿孔已經(jīng)被正式對(duì)傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法不靈的細(xì)胞有很好的效果，因此被選為**的分子傳遞系統(tǒng)。電穿孔的好處有可重復(fù)性、更高的效率、大量樣本處理、無(wú)毒性以及容易使用（不需要孵育時(shí)間）。

Lofin等人（1999）對(duì)NIH/3T3細(xì)胞進(jìn)行電穿孔使mRNA進(jìn)入，以研究細(xì)胞周期及細(xì)胞分化過(guò)程中mRNA對(duì)基因表達(dá)調(diào)節(jié)、控制。Bodwell等人（1999）在對(duì)COS-7細(xì)胞進(jìn)行電穿孔是使用較長(zhǎng)的脈沖時(shí)間后獲得了較高水平的表達(dá)。Warner等人（1997）使用電穿孔方法成功轉(zhuǎn)化了淋巴細(xì)胞。IncyteGenomics公司成功使用BTX電穿孔儀轉(zhuǎn)染了ES細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因小鼠的生產(chǎn)。BTXECM399\630\830型儀器、電穿孔杯以及多種特用的電極都用于動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染用途。

•蛋白質(zhì)電整合/電插入（系統(tǒng)：ECM630/830）

將蛋白質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞以及將蛋白質(zhì)插入至細(xì)胞膜中也可以通過(guò)電穿孔來(lái)實(shí)現(xiàn)。不光肽段，而且包括抗體的多種蛋白，也可以進(jìn)行導(dǎo)入。Ushio-Fukai等人（1998）對(duì)電穿孔插入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的外源蛋白進(jìn)行了定量。對(duì)于這些用途可以使用多種BTX電極。

•植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化（系統(tǒng)：ECM630/830）

對(duì)植物原生質(zhì)（玉米、煙草等）及完整植物的電穿孔可以用于產(chǎn)生對(duì)農(nóng)業(yè)/園藝有用的轉(zhuǎn)基因作物。植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化的一個(gè)主要目的是對(duì)植物細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)化以產(chǎn)生具有優(yōu)良品質(zhì)及產(chǎn)量增加的作物。Lin等人（1997）優(yōu)化了多種植物上用于GUS表達(dá)的電穿孔條件，結(jié)果顯示完整植物細(xì)胞以及原生質(zhì)都可以進(jìn)行有效轉(zhuǎn)化。Diaz等人（1994）針對(duì)小麥及燕麥的葉和根的原生質(zhì)進(jìn)行了相似的優(yōu)化試驗(yàn)，證明了電穿孔對(duì)于植物工作的有效性。這些作者也比較了電穿孔與PEG的差別，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電穿孔更有效、更有重復(fù)性、更經(jīng)濟(jì)。BTX是世界上體內(nèi)轉(zhuǎn)染用特殊電極的**者。對(duì)于這些用途可以使用多種BTX電極，例如2針陣列、游標(biāo)尺電極、以及Tweezertrodes。