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NanoPro 1000信號轉(zhuǎn)導蛋白磷酸化分析系統(tǒng)

在細胞生物學功能研究中，有許多常規(guī)的研究手段，如流式，生物質(zhì)譜，雙向電泳，蛋白芯片等技術(shù)。隨著研究的深入，科學家們特別需求進行真正意義上的高靈敏，高精度研究手段，力求通過一次實驗，快速發(fā)現(xiàn)更多的信息：鑒定結(jié)果更為可信，靈敏度更加提高來鑒定更多低豐度蛋白，更多的修飾信息，結(jié)構(gòu)信息等。傳統(tǒng)分析技術(shù)具有很多局限性，如雙向凝膠電泳(2DE)，對疏水性蛋白、堿性蛋白、特別是低豐度蛋白等無能為力，成為蛋白質(zhì)組研究的瓶頸; 而質(zhì)譜分析技術(shù)也是由于靈敏度等問題，需要大量的樣品等原因，十幾年來一直對研究低豐度調(diào)控蛋白缺乏信心.

傳統(tǒng)蛋白分析技術(shù)所用的蛋白量需來自成千上萬個細胞。所得結(jié)果分辨率及重復(fù)性不理想。各種蛋白分析法所需樣品量如下：

質(zhì)譜儀樣品量 100000 個細胞

細胞儀 樣品量：10000 個細胞

蛋白電泳，樣品量：5000 個細胞

蛋白芯片 樣品量：1000個細胞

ProteinSimple公司的NanoPro 1000超微量蛋白分析系統(tǒng)為蛋白功能和信號通路研究提供了一個全新的研究方案。傳統(tǒng)的蛋白研究方法需要成千上萬的細胞，而NanoPro 1000系統(tǒng)每次分析僅需要25個細胞。

并可對超微量珍貴樣品的信號轉(zhuǎn)導蛋白之特性直接檢測，適用各種樣品包括：

原代細胞

FACS 分選細胞

穿刺抽取之腫瘤細胞

顯微切片組織細胞

分離的干細胞群

NanoPro系統(tǒng)利用**的毛細管樣品定位及分析技術(shù)，結(jié)合毛細管分離及化學發(fā)光檢測原理進行納米級的自動化實驗，避免了人為操作誤差，有效提高檢測結(jié)果的精確性和重復(fù)性。過去蛋白檢測儀無法檢測到的信息，如細胞內(nèi)控制通路的調(diào)控信息，可由此精確測得。

NanoPro技術(shù)被用來分析信號轉(zhuǎn)導過程中所涉及的蛋白構(gòu)象上的極細微變化。

NanoPro1000從新的角度分析蛋白調(diào)控機制，NanoPro技術(shù)采用等電點電泳的方法將不同構(gòu)象的蛋白分離。該方法大大推進了多個領(lǐng)域的研究，包括：

藥物開發(fā)-篩選激酶抑制劑藥物的作用靶點

生物標記物的發(fā)現(xiàn)和確認-觀察疾病引起的蛋白構(gòu)象的細微變化，研究其發(fā)病機制

腫瘤蛋白活性-研究組織和細胞中腫瘤蛋白的調(diào)控機制翻譯后修飾的研究-檢測蛋白構(gòu)象改變引起的等電點極細微的變化

NanoPro 1000將蛋白分離與檢測技術(shù)相結(jié)合:

NanoPro將毛細管等電點電泳和化學發(fā)光免疫測定這兩種常用的蛋白檢測技術(shù)相結(jié)合。等電點電泳可將不同構(gòu)象的蛋白分離。分離后蛋白被儀器固定在毛細管壁上，接著用化學發(fā)光免疫的方法檢測蛋白。這為信號轉(zhuǎn)導蛋白的檢測提供了新的視角。

【操作流程】

上樣

每個毛細管中加400nl樣本混合物，包括樣本、熒光標記PI和兩性電解質(zhì)。

分離

毛細管兩端加電壓，樣本中的蛋白質(zhì)隨著自身等電點的不同，加以分離。

固定

毛細管在紫外光照射下，其毛細管壁上的**化學物質(zhì)被激活，從而將分離的蛋白異構(gòu)體固定在毛細管壁上。

免疫標記

用洗脫液將非特異結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫，將固定的蛋白質(zhì)進行免疫反應(yīng)，加入發(fā)光催化劑誘導其化學發(fā)光，發(fā)光信號被CCD攝像機拍攝下來。

結(jié)果分析

通過專業(yè)的軟件，對結(jié)果進行定量分析